Набор реагентов для цитохимического определения фосфолипидов в лейкоцитах с помощью судана черного Б

Скачать 44.8 Kb.

Название	Набор реагентов для цитохимического определения фосфолипидов в лейкоцитах с помощью судана черного Б
Тип	Инструкция

rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Инструкция

ДИАХИМ – ЦИТОСТЕЙН - СЧ

Набор реагентов для цитохимического определения фосфолипидов в лейкоцитах с помощью судана черного Б.

Инструкция по применению.

Основным компонентом жировых веществ в гемопоэтических клетках являются фосфолипиды (фосфорсодержащие сложные эфиры глицерина). Они являются составной частью структур цитоплазматической сети, пластинчатого комплекса и используются в качестве энергетического и пластинчатого комплекса и используется в качестве энергетического и пластинчатого материала.

Принцип реакции:

Выявление фосфолипидов основано на применении липофильных красителей, растворяющихся и избирательно концентрирующихся во внутриклеточных липидах.

Реагенты:

вошедшие в набор:

спиртовой раствор судана черного Б – 2фл.
спиртовой раствор фенола - 2фл.
бифосфат натрия кристаллический – 6фл.

Набор обеспечивает 6 исследований (от 1 до10 стекол за 1 исследование).

не вошедшие в набор:

1. 40% формалин;

Спирт этиловый 70º.
0,5% раствор красителя Диахим-ГемиСтейн-Р (профессионал)- по Романовскому.

4. вода дистиллированная.

Оборудование.

-секундомер; -стекла предметные;

-емкость для окраски мазков (Хеллендахела, Коплина, хим. стакан)

- микроскоп; - пробирки хим.;

-пипетки - бумага фильтровальна -цилиндры мерные перчатки резиновые вместимостью 25-500мл.

Подготовка к анализу.

Приготовление мазков крови и костного мозга:

2-3 мазка крови (или костного мозга) сделать на предметных стеклах с помощью более узкого предметного шлифованного стекла следующим образом.

На сухое предметное стекло, ближе к короткой стороне наносят пипеткой небольшую каплю крови. Предметное стекло следует держать на столе или в левой руке за узкие края. Правой рукой приставить шлифованное стекло узким краем к стеклу с кровью слева от капли под углом менее 45 и продвинуть его вправо до соприкосновения с каплей крови. Выждать до тех пор, пока кровь расплывется по всему ребру шлифованного стекла, и затем легким быстрым движением провести его справа налево до тех пор, пока не будет исчерпана вся капля. Капля крови должна быть небольшой и соразмерна так, чтобы весь мазок помещался на стекле, не доходя 1 - 1,5 см до его края. Нельзя сильно нажимать на стекло, так как многие клетки крови могут оказаться поврежденными. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет и оканчивается “метелочкой”.

После приготовления мазки следует быстро высушить на воздухе до исчезновения влажного блеска. При медленном высыхании может изменяться морфология клеток крови

Приготовление препаратов костного мозга аналогично приготовлению препаратов периферической крови.

Приготовление рабочего раствора:

Получение буферного раствора :

1. Растворить навеску фосфата натрия в 25 мл дистиллированной воды.

2. Отмерить 7,5 мл спиртового раствора фенола. Соединить с 25 мл раствора фосфата натрия. Раствор сохраняет свои свойства в течение 3 месяцев при температуре 0-+4С.

Рабочий раствор:

К 30мл спиртового раствора судана добавить 20мл буферного раствора.

Ход реакции:

Высушенные на воздухе мазки крови или костного мозга фиксируют в парах формалина во влажной закрытой камере при t 37°- 10 мин.
Быстро ополоснуть.
Просушить фильтровальной бумагой.
Поместить в рабочий красящий раствор на 1 час.
Ополоснуть в 70° этаноле 3 сек.
Быстро промыть проточной водой.
Докрасить 0,5% раствором краски Диахим-ГемиСтейн-Р (профессионал)- по Романовскому 15-20 мин.

8. Быстро промыть, промокнуть фильтровальной бумагой, высушить.

Примечание:

Цитохимические исследования проводят в мазках крови, костного мозга, лейкоконцентрата, спинномозговой жидкости, аспиратах лимфоузлов, селезенки, лейкозных инфильтратах разной локализации.

Мазки крови и костного мозга лучше делать непосредственно из материала, полученного без добавления антикоагулянтов.

При выраженной лейкопении цитохимические исследования целесообразно проводить в препаратах, полученных из лейкоконцентрата венозной крови.

Приготовленные мазки не рекомендуется хранить более 24часов, т. к. активность большинства внутриклеточных ферментов снижается .

Препараты фиксируют сразу после высушивания на воздухе.

Нефиксированные мазки могут храниться в темноте в течение 3 недель.

Результаты окраски:

Нормальные величины:

Большинство нейтрофилов (69-80%) у здоровых людей красятся интенсивно, 18-36% дают окраску средней интенсивности и 10% слабо окрашены.

СЦК в нейтрофилах 2,65-0,033.

Фосфолипиды обнаруживаются в виде коричнево-черных гранул в клетках гранулоцитарного ряда, начиная со стадии миелобласта. Наиболее богаты липидами зрелые гранулоциты, в цитоплазме которых липиды (суданофильный материал) расположена в основном в перинуклеарной зоне. В моноцитах редкие суданофильные гранулы рассеяны по всей цитоплазме.

В эозинофилах суданоположительное вещество локализуется по периферии специфических гранул, с неокрашенной центральной зоной, реакция в базофилах вариабильна.

Лимфоциты и их предшественники реагируют отрицательно. Также отрицательно реагируют тромбоциты и мегакариоциты и эритробласты. Мегакариоциты изредка могут демонстрировать диффузное окрашивание на фоне которого рассеяны очень мелкие суданофильные гранулы в цитоплазме и над ядром.

Изменения при патологических состояниях:

Липиды являются более чувствительным маркером миелоидной дифференцировки. В соответствии с ФАБ-классификацией критериями диагностики острых лейкозов для подтверждения миелоидной природы бластов необходимо выявление 3% и более бластных клеток, положительных по липидам.

Меры предосторожности.

Меры предосторожности – соблюдение «Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах ) санитарно- эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР», Москва, 1981г.

При работе следует одевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В, или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

Условия хранения и эксплуатации.

Хранение реагентов при tº 2-8º С в темном месте.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.

По всем вопросам, возникшим в результате использования набора, просим обращаться к нашим представителям или непосредственно в фирму по тел. (812) 458-44-50
НПФ "АБРИС+"

Россия, Санкт-Петербург, 196084, ул.Цветочная, д.16 БЦ «Осипофф», оф. 207
тел: 8-800-1000-422

Похожие:

	ДиаВетТест Набор ветеринарных диагностических реагентов для определения активности панкреатичес Набор ветеринарных диагностических реагентов для определения активности панкреатической амилазы в крови животных		Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения тироксина Набор реагентов «Тироидифа-тироксин-01» предназначен для количественного определения концентрации тироксина в сыворотке крови человека...
	Набор реагентов для количественного определения содержания мочевины Набор предназначен для количественного определения мочевины в сыворотке крови и моче человека уреазным методом по салицилат-гипохлоритной...		Инструкция по применению набора реагентов для иммуноферментного определения свободного тироксина Набор реагентов Тироидифа-свободныйТ4 предназначен для количественного определения содержания свободного тироксина (Т4) в сыворотке...
	Набор реагентов для количественного определения содержания креатинина Набор предназначен для количественного определения содержания креатинина в сыворотке крови и моче человека кинетическим методом в...		Набор реагентов для определения содержания глюкозы в сыворотке и плазме Набор предназначен для количественного определения глюкозы в сыворотке или плазме крови человека глюкозооксидазным методом в клинико-диагностических...
	Ддс creatinine fs* Набор реагентов для определения содержания железа в сыворотке крови Набор предназначен для количественного определения железа в сыворотке крови колориметрическим методом (без депротеинизации) в клинико-диагностических...		Фс creatinine fs* Набор реагентов для количественного определения содержания мочевой Набор предназначен для количественного определения содержания мочевой кислоты в сыворотке крови и моче человека ферментативным методом...
	Инструкция по применению наборы реагентов для определения соматических... Набор реагентов для определения соматических мутаций в гене egfr «Therascreen® egfr rgq pcr kit (24)» на 24 образца		Инструкция по применению Наборы реагентов для определения соматических... Набор лабораторных реагентов для определения соматических мутаций в гене braf «braf rgq pcr kit (24)»
	Липаза диаВетТест Набор ветеринарных диагностических реагентов для... Набор ветеринарных диагностических реагентов для определения концентрации липазы в крови животных		Набор реагентов для определения содержания альбумина в сыворотке и плазме крови человека Набор предназначен для количественного определения альбумина в сыворотке или плазме крови человека колориметрическим методом с бромкрезоловым...
	Г амма-глутамилтрансфераза диаВетТест Набор ветеринарных диагностических... Набор ветеринарных диагностических реагентов для определения активности гамма глутамилтрансферазы в крови животных		Набор реагентов для определения содержания общего белка в сыворотке и плазме крови человека Набор предназначен для количественного определения общего белка в сыворотке или плазме крови человека биуретовым методом в клинико-диагностических...
	Набор реагентов для определения содержания мочевины в сыворотке крови... Набор предназначен для количественного определения мочевины в сыворотке крови и моче человека уреазным-глутаматдегидрогеназным методом...		Инструкция набор реагентов для количественного определения содержания... Набор «альбумин uts» разрешен к производству, продаже и применению на территории РФ

Руководство, инструкция по применению